產(chǎn)品名稱(chēng)：DH5α Competent Cell
中文名稱(chēng)：DH5α 感受態(tài)細胞
產(chǎn)品編號與包裝規格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKV208-01A | DH5α Competent Cell | 100μl×10支 | 感受態(tài)細胞 | 281 |
產(chǎn)品描述：本制品是采用大腸桿菌 DH5α 菌株經(jīng) CaCl2 等處理得到的感受態(tài)細胞，可用于質(zhì)粒 DNA 熱擊轉化。DH5α 是一種常用于 質(zhì)?？寺〉木?，可與載體編碼 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現 α 互 補，可用于藍白斑篩選。recA1 和 endA1 的突變有利于克DNA 的穩定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測，轉化效率可達 108cfu/μg，適用于高效的質(zhì)粒 DNA 克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩定復制。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
φ80,lacZΔM15 基因產(chǎn)物可與 pUC19 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現 α 互補，可用于藍白斑篩選。
recA1 和 endA1 的突變有利于克隆 DNA的穩定和高純度質(zhì)粒DNA 的提取。
基因型：F-,φ80,lacZΔM15,Δ(lacZYA-argF) U169, endA1, recA1, - + - hsdR17(rk ,mk ),SupE44,λ ,gyrA96, relA1,phoA。
轉化效率：使用 pUC19 質(zhì)粒檢測，轉化效率≥1×10?cfu/μg。
保存溫度：-70℃
DH5α Competent Cell 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| DH5α Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19（1ng/μl） | 10μl |
操作方法：
1）取感受態(tài)細胞置于冰浴中，一次轉化感受態(tài)細胞的用量為 50-100μl，可根據實(shí)際情況分裝使用。所用 DNA 的體積不要超過(guò)感受態(tài)細胞的十分之一，以下實(shí)驗以 100μl 感受態(tài)細胞為例。
2）待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA（通常 100μl 感受態(tài)細胞能夠被 1ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液槍吹打混合，冰上放置30 分鐘。
3）將離心管置于 42℃水浴中，熱擊 60-90 秒，迅速將離心管置于冰上，放置 2-3 分鐘。
4）向每個(gè)離心管中加入 500μl 無(wú)菌不含抗生素的LB 或 SOC 培養基中，37℃搖床，150rpm 振蕩培養 45 分鐘，使質(zhì)粒上相關(guān)抗性基因表達，菌體復蘇。
5）吸取 200μl 已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的 LB 或 SOC 固體平板上，用無(wú)菌涂布棒將細胞均勻涂開(kāi)，將平板置于 37℃培養箱里直至液體完全吸收，倒置培養 12-16 小時(shí)。涂布量應根據具體實(shí)驗調整，如果轉化的 DNA 總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板，如果預計的克隆數較少，可 3000rpm 離心5 分鐘，吸取部分培養基，懸浮菌體后涂布在一個(gè)平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存，如果第二日轉化菌落數過(guò)少，可以將剩余菌液再涂布在新的平板上。
注意事項：
1）感受態(tài)細胞應保存于-70℃冰箱中，不可反復凍融，或放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，避免感受態(tài)轉化效率降低。
2）實(shí)驗操作時(shí)，應注意無(wú)菌條件。
3）實(shí)驗過(guò)程中，可保留部分連接反應液，當轉化不成功時(shí)，可重新轉化。
